ZKSCAN3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416370-ACT

ZKSCAN3 (proteína com dedos de zinco com domínios KRAB e SCAN 3) é um fator de transcrição nuclear que se liga ao DNA e integra interações proteicas mediadas por SCAN com a regulação transcricional dependente de KRAB. Ele modula programas de expressão gênica associados à proliferação celular, diferenciação e respostas ao estresse celular, e tem sido implicado na regulação de vias relacionadas à autofagia e aos lisossomos. Alterações na atividade de ZKSCAN3 foram relatadas em diversos contextos de doença, incluindo cânceres nos quais redes transcricionais desreguladas contribuem para crescimento invasivo e adaptação metabólica. Como um nó no controle transcricional, ZKSCAN3 é um alvo útil para dissecar sinais regulatórios a montante e assinaturas gênicas a jusante relevantes para a biologia oncogênica e de resposta ao estresse.

ZKSCAN3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZKSCAN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZKSCAN3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZKSCAN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZKSCAN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZKSCAN3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZKSCAN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZKSCAN3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZKSCAN3 em células tumorais com expressão de ZKSCAN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.