ZIP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412558-ACT

SLC39A4 codifica o transportador humano de zinco ZIP4, uma proteína de membrana multipasse que medeia a captação celular de Zn2+ extracelular e ajuda a manter a homeostase metabólica e de sinalização dependente de zinco. A atividade do ZIP4 sustenta processos que incluem diferenciação epitelial, integridade da barreira e programas transcricionais responsivos a metais, com efeitos a jusante sobre respostas ao stress oxidativo e vias de síntese proteica que requerem o zinco como cofator estrutural ou catalítico. A expressão ou função desregulada de SLC39A4 perturba a disponibilidade de zinco e tem sido associada a distúrbios de absorção de zinco e a fenótipos mais amplos envolvendo crescimento, função imunitária e manutenção de tecidos epiteliais. Como o zinco influencia numerosas enzimas e fatores de transcrição, o ZIP4 é frequentemente estudado como um regulador a montante de redes de deteção de nutrientes e adaptação ao stress.

ZIP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC39A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZIP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC39A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC39A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZIP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC39A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZIP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZIP4 em células tumorais com expressão de SLC39A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.