ZIP14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-411756-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ZIP14 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ZIP14ダブルニカースプラスミド（h）およびZIP14ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC39A14を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ZIP14 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZIP14 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-411756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC39A14 は金属イオントランスポーター ZIP14 をコードしており、ZIP14 は細胞膜およびエンドソームに局在する ZIP ファミリーの一員として、二価陽イオンの細胞内取り込みを担います。とくに亜鉛およびマンガンの恒常性維持において重要な役割を果たします。ZIP14 の活性は、金属タンパク質の機能、酸化ストレス応答、代謝シグナル伝達に影響し、さらに肝細胞や免疫細胞における炎症経路とも交差します。これらの細胞では、サイトカインシグナルによってトランスポーター発現が調節され得ます。ZIP14 依存的な金属取り扱いの破綻は、全身のマンガンクリアランスの変化や神経毒性表現型と関連づけられており、肝代謝や炎症性ストレスの文脈でも研究されています。そのため SLC39A14 は、ヒト細胞モデルにおいて、金属依存的な酵素活性の制御、トランスポーターネットワーク、ならびにストレス適応プログラムを検討するために、しばしば用いられます。
ZIP14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC39A14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC39A14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC39A14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC39A14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。