ZHX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407666-ACT

A proteína 1 com dedos de zinco e homeoboxes (ZHX1) é um fator de transcrição nuclear que contém múltiplos motivos dedo de zinco C2H2 e domínios homeobox, permitindo a ligação ao DNA de forma específica por sequência e a regulação de programas de expressão gênica associados ao destino celular e à diferenciação. A ZHX1 participa de redes de repressão/ativação transcricional ao formar parcerias com outros fatores nucleares para modular processos associados à cromatina e a transcrição específica de linhagem. Alterações na expressão de ZHX1 foram relatadas em múltiplos contextos de doença, incluindo câncer e desregulação relacionada ao sistema imune, o que é consistente com um papel no controle de vias ligadas à proliferação, à apoptose e à diferenciação. Essas características tornam a ZHX1 um nodo útil para estudar circuitos transcricionais, regulação epigenética e expressão gênica responsiva ao estresse em modelos celulares humanos.

ZHX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZHX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZHX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZHX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZHX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZHX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZHX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZHX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZHX1 em células tumorais com expressão de ZHX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.