ZFHX4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408957-ACT

ZFHX4 (zinc finger homeobox 4) codifica um grande fator de transcrição nuclear com múltiplos domínios de ligação ao DNA do tipo dedo de zinco e homeobox, que modula programas de expressão gênica responsáveis por controlar a identidade e a diferenciação celular. Ele participa de redes de regulação transcricional ligadas a processos de neurodesenvolvimento e de linhagens epiteliais, influenciando o estado da cromatina e os sinais gerados a jusante. A desregulação da expressão de ZFHX4 ou mutações nesse gene tem sido associada a trajetórias de diferenciação alteradas e à biologia tumoral em diversos contextos, o que sustenta seu uso como um nó molecular para o estudo do remodelamento transcricional oncogênico. A investigação funcional de ZFHX4 ajuda a esclarecer como fatores de transcrição integram sinais do desenvolvimento com o controle do ciclo celular e vias de adaptação ao estresse.

ZFHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZFHX4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZFHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZFHX4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZFHX4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZFHX4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZFHX4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZFHX4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZFHX4 em células tumorais com expressão de ZFHX4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.