ZDHHC20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406353-ACT

ZDHHC20 codifica uma palmitoiltransferase da família DHHC que catalisa a S-palmitoilação de resíduos de cisteína citosólicos em proteínas associadas à membrana, moldando seu tráfego, estabilidade e competência de sinalização. Ao modular ciclos dinâmicos de palmitoilação, a ZDHHC20 influencia a organização de microdomínios de membrana e vias a jusante ligadas à sinalização de receptores, ao transporte vesicular e às respostas celulares ao estresse. A alteração da homeostase da palmitoilação tem sido associada a crescimento desregulado e à sinalização imune, e a ZDHHC20 tem sido investigada no contexto da biologia do câncer, da regulação metabólica e das interações hospedeiro–patógeno. Essas características tornam a ZDHHC20 um nó útil para dissecar mecanismos de lipidiação pós-traducional e o redirecionamento de vias em células humanas.

ZDHHC20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZDHHC20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZDHHC20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZDHHC20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZDHHC20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZDHHC20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZDHHC20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZDHHC20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZDHHC20 em células tumorais com expressão de ZDHHC20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.