ZBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406434-ACT

ZBP1 (proteína de ligação ao Z-DNA 1; também conhecida como DAI) é um sensor da imunidade inata que reconhece ácidos nucleicos na forma Z e acopla sinais associados a patógenos ou a dano a respostas antivirais e inflamatórias. Após a ativação, a ZBP1 estabelece interações dependentes de RHIM com a RIPK3 e pode iniciar programas de morte celular regulada, incluindo necroptose, além de convergir com redes transcricionais conduzidas por interferon. Esse eixo de sinalização se integra às vias de receptores de reconhecimento de padrões e modula a produção de citocinas e decisões sobre o destino celular em resposta à infecção viral e ao estresse celular. A atividade desregulada de ZBP1 tem sido associada a sinalização de interferon aberrante, patologia inflamatória e interações vírus–hospedeiro relevantes para a imunologia e a pesquisa em morte celular.

ZBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZBP1 em células tumorais com expressão de ZBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.