Yes Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400261-ACT

O gene humano **YES1** codifica a tirosina-quinase não receptora Yes, um membro da família Src que retransmite sinais de receptores tirosina-quinase e de complexos de adesão célula–célula/célula–matriz para regular a proliferação, a sobrevivência, a remodelação do citoesqueleto e o tráfego vesicular. Yes participa de cascatas de fosforilação que se cruzam com as vias de sinalização de adesão focal, MAPK e PI3K, influenciando a migração celular e a mecanotransdução. A sinalização desregulada da família Src, incluindo atividade alterada de **YES1** ou mudanças no número de cópias, tem sido associada a fenótipos oncogênicos como controle aberrante do crescimento, invasão e estados de sinalização adaptativos à terapia. Por isso, **YES1** é amplamente estudado como um nó que conecta sinais próximos à membrana a programas transcricionais e metabólicos em modelos celulares relevantes para doenças.

Yes O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de YES1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Yes O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus YES1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição YES1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Yes. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus YES1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Yes no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Yes em células tumorais com expressão de YES1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.