XylT-II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404853-ACT

O gene humano **XYLT2** codifica a xilosiltransferase II (XylT-II), uma glicosiltransferase residente no complexo de Golgi que catalisa a transferência inicial de xilose para resíduos específicos de serina nas proteínas centrais dos proteoglicanos, iniciando a montagem das cadeias de glicosaminoglicanos (GAG). Essa etapa precoce sustenta a organização da matriz extracelular e influencia vias relacionadas à adesão celular, à mecanotransdução e à sinalização por fatores de crescimento por meio de proteoglicanos de heparam sulfato e de condroitina/dermatana sulfato. Assim, a atividade de **XYLT2** contribui para a biossíntese de proteoglicanos e para redes mais amplas de glicosilação que moldam a arquitetura tecidual e a comunicação intercelular. A disrupção genética de vias de montagem de proteoglicanos envolvendo **XYLT2** tem sido associada a fenótipos do tecido conjuntivo e do esqueleto, o que o torna relevante para o estudo da biologia da matriz e de mecanismos de doenças relacionadas à glicosilação.

XylT-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XYLT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XylT-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XYLT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XYLT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XylT-II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XYLT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XylT-II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XylT-II em células tumorais com expressão de XYLT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.