XIAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416497-ACT

A proteína inibidora de apoptose ligada ao X (XIAP) é um potente supressor da morte celular programada, que se liga diretamente e inibe caspases efetoras como CASP3 e CASP7, bem como a caspase iniciadora CASP9, por meio de seus domínios BIR. Além do bloqueio de caspases, a XIAP participa de sinalização dependente de ubiquitina por meio de sua atividade de ligase E3 RING, conectando-se a vias associadas ao receptor de TNF e modulando programas de sobrevivência ligados ao NF-κB. Por meio dessas atividades, a XIAP ajuda a determinar a sensibilidade celular a estímulos apoptóticos intrínsecos e extrínsecos e molda respostas adaptativas ao estresse. A expressão ou função desregulada de XIAP tem sido associada a limiares de apoptose alterados e a estados de sinalização inflamatória relevantes para a biologia do câncer e para pesquisas sobre desregulação imune.

XIAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XIAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XIAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XIAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XIAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XIAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XIAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XIAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XIAP em células tumorais com expressão de XIAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.