Xanthine Oxidase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401185-ACT

XDHはキサンチン酸化還元酵素をコードしており、キサンチンオキシダーゼとして機能することでプリン分解代謝の最終段階を触媒し、ヒポキサンチンをキサンチンへ、さらにキサンチンを尿酸へと変換します。この酵素は電子移動反応の過程で活性酸素種（ROS）の主要な産生源となり、プリン代謝を細胞のレドックス恒常性および酸化ストレスシグナル伝達と結び付けます。XDH活性は炎症経路や低酸素応答経路とも交差し、代謝ストレス下での内皮機能や組織微小環境の変化に寄与します。キサンチンオキシダーゼ活性の異常や、尿酸/ROSバランスの変化は、高尿酸血症関連の生物学、心代謝機能障害、虚血再灌流モデルなどの文脈で頻繁に研究されています。

Xanthine Oxidase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XDHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Xanthine Oxidase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XDH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXDH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Xanthine Oxidaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXDH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるXanthine Oxidase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXDH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるXanthine Oxidase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。