Plásmido Doble Nickase (h) WWOX: sc-403070-NIC

WWOX (oxidoreductasa que contiene dominios WW) es un supresor tumoral codificado dentro del sitio frágil común FRA16D y funciona como una proteína de andamiaje que integra señales en las adhesiones focales, las mitocondrias y el núcleo. A través de sus dominios WW, WWOX se une a socios ricos en prolina para modular la apoptosis, las respuestas al daño del ADN y la señalización por estrés celular, con conexiones descritas con las vías asociadas a p53 y TGF-β y con la regulación de programas transcripcionales. La pérdida o la expresión reducida de WWOX se observa con frecuencia en múltiples tipos de cáncer y se asocia con inestabilidad genómica y cambios en la supervivencia celular. En el sistema nervioso, la disfunción de WWOX se relaciona con fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su papel amplio en el control del equilibrio entre proliferación y muerte y en la homeostasis celular.

WWOX El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WWOX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WWOX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WWOX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WWOX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.