WTAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425635

Visão geral

Wtap codifica a WTAP (proteína associada ao Wilms tumor 1), um componente regulador central do complexo “writer” de N6-metiladenosina (m6A) em mRNA, que sustenta a atividade catalítica de METTL3/METTL14 e coordena a localização nuclear da maquinaria de metilação. Por meio do controle dependente de m6A do processamento de pré-mRNA, do splicing alternativo, da estabilidade dos transcritos e da tradução, a WTAP influencia a progressão do ciclo celular, a especificação de linhagens e programas de expressão gênica responsivos ao estresse. A atividade de WTAP se integra a vias de metabolismo de RNA em speckles nucleares e conecta a regulação epitranscriptômica a redes de sinalização do desenvolvimento e de diferenciação. A deposição desregulada de m6A associada à WTAP tem sido implicada em alterações de proliferação e de estados de diferenciação relevantes para a biologia do câncer e para fenótipos hematopoéticos e do desenvolvimento em sistemas modelo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO WTAP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Wtap em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Wtap, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Wtap na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína WTAP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Wtap para a investigação da sinalização de WTAP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Wtap críticos para a função WTAP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Wtap para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo WTAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo WTAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Wtap. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo WTAP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR WTAP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Wtap para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Wtap definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.