Wnt-7b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401626-ACT

WNT7B codifica a glicoproteína secretada Wnt-7b, um ligante que ativa complexos de receptores Frizzled/LRP para regular a sinalização canônica de β-catenina, bem como vias Wnt não canônicas, dependendo do contexto celular. A Wnt-7b contribui para a especificação do destino celular, o padrão de organização tecidual, as interações epitélio–mesênquima e o controle de programas de proliferação e diferenciação por meio da regulação transcricional de genes-alvo de Wnt. A desregulação da expressão de WNT7B ou da atividade da via tem sido associada a anomalias do desenvolvimento e a estados de sinalização aberrantes observados em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo processos relacionados ao câncer, como crescimento alterado, invasão e comunicação cruzada com o microambiente tumoral. A modulação de WNT7B oferece uma via prática para investigar redes transcricionais dependentes de Wnt e a intercomunicação com as vias MAPK, PI3K/AKT e TGF-β.

Wnt-7b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT7B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-7b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT7B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT7B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-7b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT7B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-7b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-7b em células tumorais com expressão de WNT7B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.