Wnt-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423720

概要

Wnt6 は、分泌型糖タンパク質である Wnt-6 をコードしており、Wnt シグナル伝達における短距離モルフォゲンとして機能し、胚発生および成体の恒常性維持の過程で、細胞運命の決定、増殖、極性、ならびに組織パターニングを制御します。マウス系では、Wnt-6 は Frizzled/LRP 受容体複合体に結合して、カノニカルな β-カテニン依存性転写を調節するだけでなく、細胞骨格の再編成や方向性移動に影響する非カノニカル経路も調節し得ます。Wnt6 活性の変化は、発生プログラムや上皮―間葉系シグナル伝達を攪乱し、これらは器官形成、再生、がん生物学モデルにおいて頻繁に研究される過程です。Wnt シグナルの制御破綻は、先天異常や腫瘍に伴う経路の再配線に広く関与するとされており、Wnt6 は機構解明のための経路解析において重要な結節点となります。

Wnt-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-6の機能に不可欠なWnt6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-6 HDRプラスミド（m）および Wnt-6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。