Wnt-5b CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-402157-ACT-2

ヒトWNT5Bは分泌性リガンドであるWnt-5bをコードしており、平面内細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca²⁺シグナル伝達などを介して細胞極性、方向性移動、細胞骨格の再構築を制御する、βカテニン非依存性（非カノニカル）Wntシグナルの主要なメディエーターである。Wnt-5bはFrizzled受容体および（RORファミリータンパク質を含む）共受容体に結合し、組織形態形成、間葉系分化、炎症シグナルとのクロストークを形作る下流エフェクターを調節する。WNT5Bの発現やシグナル伝達の異常は発生プログラムの破綻と関連づけられており、腫瘍細胞の浸潤性、代謝および脂肪細胞分化の制御、線維化リモデリングといった文脈でしばしば研究されている。WNT5Bの遺伝子編集は、リガンド特異的なWntネットワークの配線、受容体の使い分け、ならびに人工的に構築した細胞モデルやオルガノイド系における転写および表現型の帰結に関する機序研究を支える。

Wnt-5b CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WNT5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Wnt-5b CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における WNT5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWNT5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Wnt-5bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWNT5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWnt-5b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWNT5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWnt-5b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。