Wnt-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401418-ACT

WNT4 codifica a Wnt-4, um ligante glicoproteico secretado que regula decisões de destino celular, polaridade, migração e diferenciação por meio da sinalização Wnt. A Wnt-4 interage com os receptores Frizzled/LRP para modular a transcrição dependente de β-catenina, bem como as vias Wnt não canônicas de polaridade celular planar e de Ca2+, moldando programas de desenvolvimento e a homeostase tecidual. Na biologia humana, a atividade de WNT4 está intimamente ligada ao desenvolvimento do trato reprodutivo e dos rins e tem sido implicada em fenótipos endócrinos e metabólicos, sendo que a sinalização Wnt desregulada está amplamente associada à proliferação aberrante, fibrose e biologia tumoral. Essas propriedades tornam o WNT4 um nó útil para dissecar a comunicação entre vias (crosstalk) com a sinalização de TGF-β, MAPK e Hippo/YAP em modelos específicos de contexto.

Wnt-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-4 em células tumorais com expressão de WNT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.