Wnt-3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423716
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Wnt-3a O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Wnt-3a, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Wnt-3a Anticorpo (3A6): sc-136163
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Wnt-3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423716 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Wnt3a de camundongo codifica a glicoproteína secretada Wnt-3a, um ligante-chave da via canônica de sinalização Wnt/β-catenina, que regula o padrão embrionário, a manutenção de células-tronco e a morfogênese tecidual. A ligação de Wnt-3a aos receptores Frizzled/LRP estabiliza a β-catenina, permitindo programas transcricionais dependentes de TCF/LEF que coordenam proliferação, diferenciação e decisões de destino celular. Além das funções no desenvolvimento, a atividade de Wnt3a se conecta a vias que controlam a dinâmica epitélio–mesênquima, a organogênese e respostas regenerativas. A sinalização desregulada de Wnt-3a é frequentemente estudada em contextos de sinalização aberrante de β-catenina, incluindo transformação oncogênica e defeitos do desenvolvimento, tornando-a um nó central para pesquisas de vias e mecanismos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Wnt-3a (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Wnt3a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Wnt3a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Wnt3a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Wnt-3a.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Wnt3a para a investigação da sinalização de Wnt-3a, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Wnt3a críticos para a função Wnt-3a
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Wnt3a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Wnt-3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Wnt-3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Wnt3a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Wnt-3a Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Wnt-3a (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Wnt3a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Wnt3a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.