Wnt-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423715

Visão geral

Wnt3 codifica a Wnt-3, um ligante glicoproteico secretado que inicia a sinalização Wnt ao se ligar aos receptores Frizzled e aos correceptores LRP5/6, regulando a especificação do destino celular, a proliferação e o padrão de organização dos tecidos. Em camundongos, a Wnt-3 é um fator-chave dos programas transcricionais canônicos β-catenina/TCF durante a embriogênese inicial e a formação do eixo, com efeitos a jusante sobre a diferenciação e processos morfogenéticos. A atividade alterada de Wnt3 perturba redes de sinalização do desenvolvimento e pode contribuir para uma saída desregulada da via, associada a anomalias congênitas e a contextos oncogênicos de sinalização Wnt/β-catenina. Como ligante da via, a Wnt-3 também é relevante para estudar a comunicação cruzada com as vias BMP, FGF e Notch em modelos de manutenção e diferenciação de células-tronco.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Wnt3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Wnt3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Wnt3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Wnt-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Wnt3 para a investigação da sinalização de Wnt-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Wnt3 críticos para a função Wnt-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Wnt3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Wnt-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Wnt-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Wnt3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Wnt-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Wnt-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Wnt3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Wnt3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.