Wnt-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402665-ACT

O WNT2 humano codifica a Wnt-2, um ligante glicoproteico secretado que ativa a sinalização Wnt para regular o desenvolvimento embrionário, o padronamento tecidual e a comunicação estroma–epitélio no adulto. A Wnt-2 interage principalmente com receptores Frizzled e co-receptores LRP5/6 para promover a estabilização da β-catenina e programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e decisões de destino celular. Também se articula com vias Wnt não canônicas, que influenciam a dinâmica do citoesqueleto e a migração de maneira dependente do contexto. A expressão desregulada de WNT2 e a atividade da via têm sido associadas a alterações de morfogênese e a mudanças de sinalização no microambiente relevantes para processos oncogênicos e remodelamento fibrótico, sustentando seu estudo como um nó de via em modelos relevantes para doenças.

Wnt-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-2 em células tumorais com expressão de WNT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.