WNK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407834-ACT

WNK2 (with-no-lysine [K] kinase 2) codifica uma quinase de serina/treonina que atua como reguladora a montante do transporte de íons e da sinalização celular, influenciando cascatas de fosforilação que modulam transportadores de membrana e a dinâmica do citoesqueleto. Em células humanas, a WNK2 integra sinais que afetam o equilíbrio osmótico e os desfechos de sinalização associados à MAPK, moldando processos como proliferação, migração e respostas ao estresse. A alteração da expressão de WNK2 ou do seu controle regulatório tem sido associada a redes de sinalização desreguladas na biologia do câncer e em outros contextos em que o equilíbrio de vias guiadas por quinases é perturbado, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de crosstalk entre vias. Como uma quinase com efeitos em nível de via, a WNK2 é frequentemente investigada pelo seu impacto na regulação de transportadores a jusante e na reprogramação da sinalização em modelos celulares relevantes para doenças.

WNK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WNK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WNK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WNK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WNK2 em células tumorais com expressão de WNK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.