WISP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402996-ACT

WISP2 (WISP-2/CCN5) é uma proteína matricelular secretada da família CCN que integra sinais da matriz extracelular com a sinalização de fatores de crescimento, influenciando a adesão, a migração e a proliferação celular. Ela é regulada a jusante de Wnt/β-catenina e interage com vias mediadas por TGF-β, IGF e integrinas, que controlam a remodelação do citoesqueleto e a comunicação estroma–epitélio. Em tecidos humanos, a expressão de WISP-2 tem sido associada a programas de remodelação tecidual e a respostas fibroproliferativas, e sua desregulação é estudada em contextos como biologia do câncer, inflamação metabólica e patologia vascular. Essas propriedades fazem de WISP-2 um nó útil para investigar o controle transcricional dependente de MEC, transições de estado celular e fenótipos direcionados pelo microambiente.

WISP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WISP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WISP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WISP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WISP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WISP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WISP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WISP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WISP-2 em células tumorais com expressão de WISP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.