Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Wip1: sc-400980-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Wip1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Wip1 (h) y el plásmido de doble nickasa Wip1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PPM1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Wip1 Anticuerpo (F-10): sc-376257
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Wip1 | sc-400980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Wip1 | sc-400980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPM1D codifica Wip1 (PPM1D), una fosfatasa de proteínas Ser/Thr dependiente de Mg2+/Mn2+ que actúa como regulador por retroalimentación de la señalización del daño en el ADN. Wip1 atenúa las vías de respuesta al estrés al desfosforilar mediadores clave, entre ellos p53, componentes de la vía ATM/ATR y nodos de señalización MAPK, modulando así la recuperación de los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis. A través de estas actividades, PPM1D influye en la estabilidad del genoma, la tolerancia al estrés replicativo y las salidas de señalización inflamatoria. La actividad alterada de PPM1D/Wip1 se ha asociado con una reparación del ADN y un control de los puntos de control desregulados en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como diana mecanística en la investigación de la integridad genómica.
Wip1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPM1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPM1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPM1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPM1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.