WDR82 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406963-ACT

WDR82 (domínio de repetição WD 82) codifica uma proteína contendo repetições WD40 que atua como um fator regulador associado à cromatina, conectando a transcrição ao processamento de RNA. Ela tem sido implicada no controle da expressão gênica em regiões próximas ao promotor e na coordenação de estados de modificação de histonas por meio de interações com complexos proteicos nucleares que moldam a saída transcricional. Por meio dessas funções, o WDR82 pode influenciar vias que governam a progressão do ciclo celular, a estabilidade do genoma e programas transcricionais responsivos ao estresse. Expressão desregulada ou função alterada de WDR82 foi relatada em múltiplos contextos de câncer e biologia do desenvolvimento, sustentando sua utilidade como alvo para estudos mecanísticos de regulação epigenética e controle transcricional.

WDR82 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR82 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR82 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR82 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR82, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR82. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR82 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR82 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR82 em células tumorais com expressão de WDR82 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.