WDR77 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403890-ACT

WDR77 (também conhecido como MEP50) codifica uma proteína de arcabouço com repetições WD que atua como cofator essencial da PRMT5, coordenando a dimetilação simétrica de resíduos de arginina em histonas e em diversas proteínas ligadoras de RNA. Por meio desse complexo PRMT5–WDR77, o WDR77 contribui para o remodelamento da cromatina, a regulação transcricional e programas de splicing de RNA que governam a progressão do ciclo celular e a expressão gênica específica de linhagem. Redes de metilação associadas ao WDR77 interseccionam vias que controlam respostas a dano no DNA e a transcrição dependente de sinais, conectando a regulação epigenética aos estados de proliferação celular. A desregulação da atividade de PRMT5/WDR77 e das assinaturas de metilação a jusante foi relatada em múltiplos contextos de câncer e desenvolvimento, motivando estudos mecanísticos do controle gênico dependente de WDR77.

WDR77 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR77 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR77 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR77 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR77, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR77. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR77 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR77 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR77 em células tumorais com expressão de WDR77 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.