WDR7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404232-ACT

WDR7 (domínio de repetições WD 7) codifica uma proteína de suporte (scaffold) com repetições WD40, prevista para mediar a montagem de complexos multiproteicos e coordenar interações proteína–proteína no citoplasma. Embora suas funções mecanísticas ainda não estejam completamente definidas, a WDR7 tem sido associada à regulação da sinalização intracelular e a processos vesiculares/de tráfego que dependem da formação ordenada de complexos. Em estudos de genética humana, a WDR7 foi associada a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, sustentando a continuidade das investigações sobre como alterações na dosagem de WDR7 desorganizam redes de sinalização neuronal e a homeostase celular. Essas características tornam a WDR7 um alvo relevante para mapeamento de vias e genômica funcional em modelos celulares relevantes para doenças.

WDR7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR7 em células tumorais com expressão de WDR7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.