WDR68 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409221-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- WDR68 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- WDR68ダブルニカースプラスミド（h）およびWDR68ダブルニカースプラスミド（h2）は、DCAF7を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
WDR68 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-409221-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WDR68 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-409221-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCAF7（WDR68）は、保存性の高いWDリピートを持つ足場（スキャフォールド）タンパク質をコードしており、シグナル伝達複合体の組み立てを支えるとともに、キナーゼによる転写制御や発生プログラムの調節を統合します。WDR68は、プロテインキナーゼや転写調節因子との相互作用を介してMAPK関連シグナルや核内イベントの調節に関与することが示唆されており、細胞外からの刺激を遺伝子発現変化へと結び付けます。タンパク質複合体の安定性や細胞内局在に影響を与えることで、WDR68は細胞増殖および分化の制御にも寄与します。WDR68に関連するネットワークの機能破綻は、異常なキナーゼ経路や転写経路が関与するがん関連シグナルやその他の疾患の文脈で検討されています。
WDR68 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DCAF7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DCAF7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DCAF7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DCAF7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。