WDR62 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410410-ACT

WDR62は、WDリピートを含む足場（スキャフォールド）タンパク質をコードしており、中心体および紡錘極に局在して微小管の構築と有糸分裂の進行を協調的に制御します。細胞周期の制御、神経前駆細胞の増殖、ストレス応答性シグナル伝達に広く関与するとされ、有糸分裂キナーゼのネットワークやJNK関連経路にまたがる相互作用が報告されています。ヒトの生物学においては、WDR62は神経発達に関わる表現型や神経細胞分化の変化と関連づけられており、対称／非対称分裂や大脳皮質の発生における役割と整合します。こうした経路レベルの結びつきから、疾患関連の細胞モデルにおけるゲノム安定性、中心体機能、増殖制御の機構を解明するための有用な標的となります。

WDR62 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WDR62の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WDR62 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WDR62 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWDR62転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WDR62の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWDR62遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWDR62依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWDR62発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWDR62経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。