WDR22 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435826

Visão geral

Dcaf5 codifica WDR22, uma proteína que contém repetições WD e está implicada na biologia da ligase E3 de ubiquitina DDB1–CUL4, na qual adaptadores com repetições WD ajudam a conferir especificidade de substrato para a proteostase dependente de ubiquitina. Por meio desses complexos, a WDR22 está posicionada para influenciar a degradação proteica regulada que coordena a progressão do ciclo celular, o controle de qualidade associado à replicação/reparo do DNA e a sinalização responsiva ao estresse. Dinâmicas alteradas de ubiquitinação são amplamente relevantes para mecanismos de instabilidade genômica e proliferação desregulada, tornando Dcaf5/WDR22 um ponto de entrada útil para estudar vias ligadas à transformação oncogênica e a outros distúrbios proliferativos em sistemas modelo. Em camundongos, a perturbação genética de Dcaf5 pode ajudar a definir papéis específicos de tecido e de contexto das redes de ligases de ubiquitina associadas a DCAF.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO WDR22 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dcaf5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dcaf5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dcaf5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína WDR22.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dcaf5 para a investigação da sinalização de WDR22, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dcaf5 críticos para a função WDR22
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dcaf5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo WDR22 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo WDR22 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dcaf5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo WDR22 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR WDR22 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dcaf5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dcaf5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.