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WBSCR16CRISPR激活质粒(h) | sc-413429-ACT | 20 µg | $397.00 |
RCC1L(WBSCR16)编码一种线粒体定位的、RCC1 样蛋白,参与协调线粒体核糖体生物发生并支持氧化磷酸化能力。WBSCR16 通过影响线粒体核糖体的组装以及线粒体 RNA 代谢,帮助维持线粒体蛋白质稳态(proteostasis)并确保电子传递链高效运作。该通路受到扰动时,可能改变细胞能量稳态、线粒体应激反应,以及与代谢适应相关的下游信号传导。WBSCR16 已在线粒体功能障碍表型的研究中被探讨,并与涉及线粒体翻译与呼吸受损疾病的机制研究相关。
WBSCR16 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RCC1L的表达。
WBSCR16 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的RCC1L基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于RCC1L转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性WBSCR16表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的RCC1L位点,并能够研究内源性位点上依赖于WBSCR16的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RCC1L表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟WBSCR16通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。