WBP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409856-ACT

WBP2 (proteína de ligação ao domínio WW 2) atua como um adaptador e co-regulador transcricional que se liga a parceiros que contêm domínios WW e integra sinais de diferentes vias em programas de expressão gênica. Participa de vias associadas à sinalização por receptores e à sinalização nuclear, incluindo a regulação da transcrição por meio de interações com complexos coativadores e a modulação de saídas transcricionais relacionadas à proliferação e à diferenciação. A atividade de WBP2 tem sido estudada no contexto de estados de sinalização alterados na biologia do câncer, em que mudanças nas redes de co-regulação podem influenciar o crescimento celular e fenótipos migratórios. Essas propriedades tornam a WBP2 um nó útil para investigar circuitos transcricionais, regulação gênica dependente de sinal e remodelamento de vias específico do contexto em células humanas.

WBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WBP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WBP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WBP2 em células tumorais com expressão de WBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.