WASP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400712-ACT

O gene **WAS** humano codifica a proteína da síndrome de Wiskott–Aldrich (WASP), um regulador restrito a células hematopoéticas da remodelação do citoesqueleto de actina, que conecta a sinalização proximal aos receptores à nucleação de actina dependente de Arp2/3. Por meio de interações com Cdc42, fosfoinositídeos e adaptadores com domínio SH3, a WASP coordena a formação da sinapse imune, a quimiotaxia, a fagocitose e o tráfego vesicular, moldando a ativação de células T e células B, bem como funções efetoras da imunidade inata. A atividade da WASP integra sinais de imunorreceptores e integrinas para controlar a dinâmica do citoesqueleto e as respostas transcricionais durante as respostas imunes. A disfunção do WAS está associada à imunodeficiência e à inflamação desregulada, tornando o eixo WAS/WASP um alvo central para estudos mecanísticos da sinalização guiada pelo citoesqueleto em células imunes humanas.

WASP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WAS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WASP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WAS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WAS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WASP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WAS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WASP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WASP em células tumorais com expressão de WAS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.