VPS45 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411599-LAC

VPS45 codifica um regulador da família Sec1/Munc18 da fusão de membranas dependente de SNARE, essencial para o tráfego endossomal e o ancoramento de vesículas. Em células humanas, o VPS45 sustenta a função do endossomo precoce e as vias de reciclagem ao coordenar eventos de ancoramento e fusão de vesículas que influenciam a renovação de receptores, a triagem de cargas e a sinalização a jusante. A disrupção de VPS45 perturba o transporte do endossomo para a membrana plasmática e a homeostase endolisossomal, processos associados a comprometimento da função de células imunes e a alterações da proteostase. Estudos genéticos implicam VPS45 em distúrbios congênitos com desregulação imune e inflamação, destacando sua relevância para estudos mecanísticos do transporte intracelular em contextos de doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais VPS45 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de VPS45 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais VPS45 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição VPS45, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de VPS45. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo VPS45 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.