VPS26B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410249

Visão geral

VPS26B codifica uma subunidade central do complexo seletivo de carga do retromer, que regula o transporte retrógrado do endossomo para o Golgi e a reciclagem endossomal de proteínas transmembrana. Ao coordenar o reconhecimento de cargas com a maquinaria de triagem endossomal, VPS26B ajuda a manter a homeostase de receptores, o tráfego vesicular e a integridade de organelas — processos que influenciam a amplitude de sinalização e a renovação de proteínas de membrana. Vias associadas ao retromer interagem com a autofagia, a função lisossomal e o transporte polarizado, tornando VPS26B relevante para o estudo da manutenção neuronal e da proteostase em geral. A desregulação do tráfego endossomal e a disfunção do retromer têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e do desenvolvimento, sustentando a investigação mecanística de VPS26B em modelos celulares relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VPS26B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VPS26B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VPS26B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VPS26B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VPS26B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VPS26B para a investigação da sinalização de VPS26B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VPS26B críticos para a função VPS26B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VPS26B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VPS26B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VPS26B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VPS26B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VPS26B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VPS26B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VPS26B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VPS26B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.