VPAC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423678

概要

Vipr1は、クラスBのGタンパク質共役型受容体であるVPAC1をコードしており、血管作動性腸管ペプチド（VIP）および下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチドに結合して、主にGsに共役し、細胞内cAMPを上昇させます。VPAC1シグナルはPKA/CREB依存性の転写プログラムを作動させ、MAPKやPI3K経路ともクロストークして、細胞増殖、分化、上皮バリア機能、サイトカイン応答を制御し得ます。マウス組織においてVPAC1は、炎症シグナルの調節や平滑筋／分泌活動の制御を含む、神経内分泌および免疫調節回路に寄与します。VIP–VPAC1軸の破綻は、炎症性腸疾患、喘息様の気道炎症、腫瘍関連微小環境のシグナル伝達のモデルで示唆されており、GPCR駆動の免疫・上皮プロセスに関する機序研究を支持します。

VPAC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVipr1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vipr1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vipr1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPAC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPAC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vipr1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPAC1の機能に不可欠なVipr1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vipr1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPAC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVPAC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vipr1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPAC1 HDRプラスミド（m）および VPAC1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVipr1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVipr1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。