Von Hippel Lindau/VHL Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400528-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Von Hippel Lindau/VHLO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Von Hippel Lindau/VHL (h) e o Plasmídeo Double Nickase Von Hippel Lindau/VHL (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para VHL. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Von Hippel Lindau/VHL Anticorpo (VHL40): sc-135657
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Von Hippel Lindau/VHL Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Von Hippel Lindau/VHL Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O VHL codifica o supressor tumoral von Hippel–Lindau, o componente de reconhecimento do substrato de um complexo de ligase E3 de ubiquitina Cullin 2–RING que direciona o HIF-α hidroxilado para ubiquitinação e degradação proteassomal em normóxia. Ao conectar a detecção de oxigênio ao controle transcricional de programas de angiogênese, metabolismo, eritropoiese e matriz extracelular, o VHL ajuda a manter a homeostase celular e respostas hipóxicas adequadas. A perda ou disfunção do VHL desregula a sinalização de HIF e reprograma vias ligadas à biologia vascular, ao metabolismo mitocondrial e à proteostase. A alteração do VHL está intimamente associada à doença hereditária de VHL e é frequentemente estudada em modelos de carcinoma de células renais para investigar a biologia tumoral dirigida pela hipóxia e a adaptação ao microambiente.
Von Hippel Lindau/VHL O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus VHL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de VHL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função VHL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com VHL interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.