VLDLR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401310-ACT

VLDLR（超低比重リポタンパク質受容体）はLDL受容体ファミリーの一員で、アポリポタンパク質E含有リポタンパク質および細胞外マトリックス糖タンパク質リールイン（reelin）に結合し、エンドサイトーシスとシグナル伝達を結び付けます。リールイン経路においてVLDLRはDAB1のリン酸化と連動して、神経細胞の移動、シナプス構造の組織化、大脳皮質層の形成を制御します。神経系以外では、VLDLRは脂質の取り込みや細胞内輸送に関与し、細胞代謝や膜恒常性に影響を与えます。VLDLRの発現やシグナル伝達の異常は、神経発達に関わる表現型や脂質取り扱いの変化と関連づけられており、心代謝および神経科学研究の文脈で注目されています。

VLDLR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VLDLRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VLDLR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VLDLR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVLDLR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VLDLRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVLDLR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVLDLR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVLDLR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVLDLR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。