VILL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423675

概要

Vill は villin-like（VILL）をコードしており、VILL はアクチン結合性の細胞骨格タンパク質です。上皮組織で豊富に発現し、F-アクチンネットワークの組織化およびリモデリングに寄与します。villin/ゲルソリン・スーパーファミリーのタンパク質は、アクチンフィラメントの切断、束化、安定化を制御し、カルシウムやホスホイノシチドからのシグナルを細胞形態、極性、バリア関連構造の変化へと結び付けます。これらの機能を通じて、VILL は上皮分化、微絨毛の構築、ならびに組織恒常性に影響する動的な接着結合部の再構築を制御する経路に関与します。アクチンダイナミクスの破綻や上皮構造の健全性低下は、炎症、バリア機能障害、腫瘍に伴うリモデリングに広く関係するため、Vill は細胞骨格制御の分子機構を検討するうえで有用な遺伝子座です。

VILL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVill遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vill内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Villのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VILLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VILLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vill欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VILLの機能に不可欠なVillエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Villゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VILL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVILL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vill遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VILL HDRプラスミド（m）および VILL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVillホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVill標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。