VHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405733

概要

二重特異性タンパク質ホスファターゼ3（DUSP3、別名VHR）は、非典型的な二重特異性ホスファターゼであり、MAPキナーゼ上のホスホチロシン残基およびホスホセリン／スレオニン残基を脱リン酸化します。VHRはMAPK/ERKシグナル伝達のダイナミクスを調節し、増殖因子や免疫関連刺激に応答した下流での細胞周期進行、ストレス応答、シグナル終結の制御に寄与します。リン酸化依存的な転写プログラムを微調整することで、DUSP3はヒト細胞における増殖および分化の表現型に影響を与えます。ホスファターゼ活性の破綻やMAPK経路制御の異常は、がん生物学や炎症性シグナル伝達にしばしば関与するため、DUSP3はリン酸化制御の機構研究に有用な解析ノードとなります。

VHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUSP3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUSP3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUSP3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VHRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VHRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUSP3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VHRの機能に不可欠なDUSP3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUSP3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUSP3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VHR HDRプラスミド（h）および VHR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUSP3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUSP3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。