VASP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401104-ACT

A VASP humana (vasodilator-stimulated phosphoprotein, fosfoproteína estimulada por vasodilatador) é uma proteína reguladora de actina da família Ena/VASP que coordena o alongamento de filamentos de actina, a dinâmica de adesões focais e a protrusão de membrana durante o espalhamento e a motilidade celular. Por meio de interações com profilina-actina e F-actina, a VASP integra sinais a jusante de quinases dependentes de cAMP/cGMP e de vias de GTPases da família Rho para ajustar a remodelação do citoesqueleto e a adesão célula–célula ou célula–matriz. O controlo, dependente de VASP, da função de barreira endotelial, da ativação plaquetária e da migração dirigida liga este nó a processos relevantes para a biologia vascular, a inflamação e o comportamento celular invasivo. Alterações na atividade ou na expressão de VASP têm sido estudadas em contextos como a remodelação cardiovascular e a migração associada ao cancro, tornando-a uma ferramenta útil para investigar fenótipos impulsionados pela actina.

VASP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VASP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VASP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VASP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VASP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VASP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VASP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VASP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VASP em células tumorais com expressão de VASP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.