Vangl2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400805-ACT

VANGL2は、発生期および成体上皮において、細胞の方向性をもった挙動や組織構築を協調的に制御する、平面内細胞極性（PCP）の中核因子であるVangl2をコードします。Vangl2は非カノニカルWNT/PCPシグナル伝達に関与し、Dishevelledとの相互作用や、その下流のRhoA/ROCKおよびJNK経路を介して、細胞骨格の再編成、極性化した移動、配向性をもつ細胞分裂に影響します。VANGL2の制御異常は、収束伸長運動や神経管閉鎖の障害と関連しており、PCPシグナルの破綻は、がん生物学や神経発達障害に関わる上皮の組織化変化としばしば結び付けられます。極性決定因子としてのVangl2は、繊毛形成、細胞間接着の維持、集団細胞移動といった文脈でも研究されています。

Vangl2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VANGL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Vangl2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VANGL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVANGL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Vangl2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVANGL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVangl2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVANGL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVangl2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。