V-ATPase D1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419255

Visão geral

Atp6v0d1 codifica a subunidade D1 do domínio V0 da H\+-ATPase vacuolar (V-ATPase), uma bomba de prótons que promove a acidificação de endossomos, lisossomos e outros compartimentos intracelulares em células de camundongo. A regulação de pH dependente da V-ATPase sustenta a endocitose mediada por receptores, o fluxo autofágico, a proteólise lisossomal e o tráfego de membranas, além de contribuir para a homeostase de organelas acoplada ao sensoriamento de nutrientes pelo mTORC1. A disrupção de componentes da V-ATPase está amplamente associada a defeitos na triagem vesicular, redução da capacidade degradativa e alteração de saídas de sinalização que podem influenciar a neurodegeneração, a função de células imunes e a adaptação metabólica associada ao câncer. Assim, Atp6v0d1 é um alvo útil para estudar como a acidificação de organelas se cruza com a proteostase e vias de resposta ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO V-ATPase D1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Atp6v0d1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Atp6v0d1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Atp6v0d1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína V-ATPase D1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Atp6v0d1 para a investigação da sinalização de V-ATPase D1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Atp6v0d1 críticos para a função V-ATPase D1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Atp6v0d1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo V-ATPase D1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo V-ATPase D1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Atp6v0d1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo V-ATPase D1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR V-ATPase D1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Atp6v0d1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Atp6v0d1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.