V-ATPase C1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402679-NIC

ATP6V1C1 codifica a subunidade C1 da H+-ATPase vacuolar humana (V-ATPase) no domínio V1, um componente central do setor citosólico que hidrolisa ATP e fornece energia para a translocação de prótons através de membranas endomembranares e da membrana plasmática. A acidificação promovida pela V-ATPase é essencial para a maturação de endossomos e lisossomos, a endocitose mediada por receptores, o fluxo autofágico e o tráfego vesicular, além de sustentar o processamento dependente de pH de macromoléculas nas vias secretoras e degradativas. Por meio da regulação do pH de organelas e do acoplamento a redes de sensoriamento de nutrientes, como o mTORC1 no lisossomo, a atividade da V-ATPase influencia o metabolismo celular, respostas ao estresse e a renovação (turnover) de proteínas de membrana. A desregulação da função da V-ATPase e alterações na homeostase do pH compartimental têm sido associadas a fenótipos relevantes para neurodegeneração, invasão tumoral/potencial metastático e defeitos no processamento de antígenos e na sinalização imune, tornando o ATP6V1C1 um alvo útil para estudos mecanísticos de biologia dependente de acidificação.

V-ATPase C1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP6V1C1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP6V1C1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP6V1C1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP6V1C1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.