V-ATPase A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400975

Visão geral

ATP6V0A1 codifica a isoforma a1 da subunidade “a” do domínio V0 da H\+-ATPase vacuolar (V-ATPase), uma bomba de prótons multissubunitária que acidifica endossomos, lisossomos e vesículas secretoras. Ao estabelecer gradientes de pH no lúmen, a V-ATPase A1 dá suporte à endocitose mediada por receptores, à proteólise lisossomal, ao fluxo autofagia–lisossomo e ao tráfego vesicular, além de contribuir para a homeostase iônica e a maturação de organelas. A perturbação da acidificação dependente de V-ATPase está associada a defeitos na renovação de proteínas e no transporte de membranas, com impactos a jusante nas respostas celulares ao estresse e em fenótipos ligados à neurodegeneração e ao câncer. Como reguladora central da acidificação de organelas, a V-ATPase A1 é frequentemente estudada em vias que controlam a detecção de nutrientes, a sinalização do mTORC1 nos lisossomos e a dinâmica endolisossomal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO V-ATPase A1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ATP6V0A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ATP6V0A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ATP6V0A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína V-ATPase A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ATP6V0A1 para a investigação da sinalização de V-ATPase A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ATP6V0A1 críticos para a função V-ATPase A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ATP6V0A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo V-ATPase A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo V-ATPase A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ATP6V0A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo V-ATPase A1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR V-ATPase A1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ATP6V0A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ATP6V0A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.