V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400975

概要

ATP6V0A1は、液胞型H\+-ATPase（V-ATPase）を構成するV0ドメインの「a」サブユニットのa1アイソフォームをコードしています。V-ATPaseは複数サブユニットからなるプロトンポンプで、エンドソーム、リソソーム、分泌小胞の酸性化を担います。内腔のpH勾配を形成することで、V-ATPase A1は受容体介在性エンドサイトーシス、リソソームでのタンパク質分解、オートファジー－リソソームフラックス、小胞輸送を支え、さらにイオン恒常性やオルガネラ成熟にも寄与します。V-ATPase依存的な酸性化の破綻は、タンパク質代謝回転や膜輸送の異常と関連し、その下流で細胞ストレス応答、神経変性やがんに関連する表現型に影響を及ぼします。オルガネラ酸性化の中核的制御因子として、V-ATPase A1は栄養感知、リソソームにおけるmTORC1シグナル伝達、エンドリソソーム動態を制御する経路で頻繁に研究されています。

V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATP6V0A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATP6V0A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATP6V0A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、V-ATPase A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、V-ATPase A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATP6V0A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• V-ATPase A1の機能に不可欠なATP6V0A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATP6V0A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびV-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATP6V0A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  V-ATPase A1 HDRプラスミド（h）および V-ATPase A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATP6V0A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATP6V0A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。