utrophin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400522-LAC

O UTRN humano codifica a utrofina, um adaptador citoesquelético associado à distrofina que liga a F-actina ao complexo distroglicano no sarcolema, ajudando a organizar a estabilidade de membrana e a transdução de sinais. A utrofina participa da montagem e da manutenção do complexo distrofina–glicoproteína e interage com a matriz extracelular, influenciando a mecanotransdução e a polaridade celular. Sua expressão é regulada ao longo do desenvolvimento e pode ser modulada em resposta a lesão e remodelamento muscular, o que a torna relevante para estudos da integridade das miofibras e da organização da junção neuromuscular. Alterações nos níveis e na localização da utrofina são comumente examinadas no contexto de distrofias relacionadas à distrofina (distrofinopatias) e de modelos associados de degeneração muscular, como um parálogo funcional dentro da mesma via estrutural.

As Partículas de Ativação Lentivirais utrophin (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de UTRN numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais utrophin (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição UTRN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de utrophin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo UTRN e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.