utrophin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400522-ACT

O UTRN humano codifica a utrofina, uma proteína citoesquelética relacionada à distrofina que conecta a rede de actina ao complexo distrofina–glicoproteína no sarcolema e em domínios de membrana especializados, como a junção neuromuscular. A utrofina contribui para a estabilidade da membrana, a mecanotransdução e a organização da sinalização associada à adesão ao coordenar interações entre componentes da matriz extracelular, receptores transmembrana e estruturas de ancoragem intracelulares. Sua expressão é regulada ao longo do desenvolvimento e frequentemente enriquecida em regiões sinápticas, dando suporte a estudos da arquitetura das fibras musculares e da manutenção das sinapses. Alterações na abundância ou na localização da utrofina são frequentemente investigadas no contexto da biologia das distrofias musculares e de vias compensatórias que influenciam a integridade muscular.

utrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UTRN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

utrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UTRN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UTRN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de utrophin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UTRN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de utrophin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via utrophin em células tumorais com expressão de UTRN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.