UTF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423632

Visão geral

O Utf1 de camundongo codifica a UTF1, um regulador transcricional associado à cromatina, enriquecido em células-tronco embrionárias pluripotentes e em linhagens embrionárias precoces. A UTF1 contribui para a manutenção do estado indiferenciado ao modular programas transcricionais ligados à autorrenovação e ao comprometimento de linhagem, incluindo interações com mecanismos epigenéticos que moldam a acessibilidade de promotores e a produção de RNA. Sua expressão é estreitamente acoplada às redes de pluripotência e é comumente utilizada como indicador molecular da identidade de células-tronco e da eficiência de reprogramação. Assim, a atividade desregulada de Utf1/UTF1 é relevante para modelos de defeitos do desenvolvimento e de desdiferenciação oncogênica, nos quais podem emergir estados de expressão gênica semelhantes aos de pluripotência.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UTF1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Utf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Utf1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Utf1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UTF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Utf1 para a investigação da sinalização de UTF1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Utf1 críticos para a função UTF1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Utf1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UTF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo UTF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Utf1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UTF1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR UTF1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Utf1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Utf1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.