Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400381-NIC

SCGB1A1 codifica a uteroglobina (também conhecida como CC10/CCSP), um membro secretado da família das secretoglobinas produzido predominantemente por células club das vias aéreas e por outros epitélios mucosos. A uteroglobina atua como uma proteína com funções anti-inflamatórias, imunomoduladoras e associadas à atividade antioxidante, podendo influenciar a homeostase da barreira epitelial e regular respostas a agressões ambientais, em parte por modular a sinalização de citocinas e processos relacionados a eicosanoides. A expressão de SCGB1A1 é amplamente utilizada como marcador de diferenciação de células club e do estado do epitélio das vias aéreas, ligando-a a vias que governam a defesa mucosa, o reparo tecidual e a regulação da imunidade inata. Alterações nos níveis de SCGB1A1 e a disfunção de células club são estudadas no contexto de condições inflamatórias das vias aéreas, respostas à exposição à fumaça ou poluentes e fenótipos de remodelamento epitelial relevantes para modelos de doenças respiratórias.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SCGB1A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SCGB1A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SCGB1A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SCGB1A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.