USP9X Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402285-ACT

USP9X (peptidase específica de ubiquitina 9 ligada ao X) é uma enzima desubiquitinante que regula a estabilidade proteica e a intensidade da sinalização ao remover cadeias de ubiquitina de proteínas-substrato. Ela influencia a proteostase, o tráfego endocítico e vias de resposta ao estresse, e tem sido associada à modulação de apoptose, ao controle do ciclo celular e às respostas a dano no DNA por meio da estabilização dependente do contexto de componentes-chave de sinalização. A atividade da USP9X intersecciona redes de ubiquitina–proteassoma e de autofagia, moldando decisões de diferenciação e sobrevivência celular. A expressão ou função desregulada de USP9X tem sido associada a múltiplos cânceres e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos da sinalização por ubiquitina em células humanas.

USP9X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP9X sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP9X O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP9X em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP9X, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP9X. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP9X nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP9X no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP9X em células tumorais com expressão de USP9X silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.