USP43 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416563-ACT

A USP43 humana codifica uma enzima desubiquitinante no sistema ubiquitina–proteassoma que catalisa a remoção de ubiquitina de proteínas substrato, modulando sua estabilidade, localização e os desfechos de sinalização. Ao ajustar a degradação proteica dependente de ubiquitina, a USP43 pode influenciar processos centrais como a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a regulação da expressão gênica associada à cromatina. A desregulação de vias de desubiquitinação é frequentemente associada à instabilidade genômica e a fenótipos de proliferação aberrante, tornando a USP43 um alvo relevante para estudos mecanísticos em modelos celulares ligados a doenças. O perfilamento da sinalização de ubiquitina dependente de USP43 pode ajudar a esclarecer como redes de proteostase se conectam com respostas a estresse e programas transcricionais específicos de linhagem.

USP43 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP43 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP43 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP43 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP43, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP43. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP43 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP43 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP43 em células tumorais com expressão de USP43 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.